微生物鑒定質譜儀通過測量帶電粒子在電場或磁場中的運動來確定其質量與電荷比（m/z）。具體到MALDI-TOFMS，它通過激光使樣品中的分子解吸和電離，然后測量這些離子飛行時間（TOF）以確定其m/z。由于不同微生物的蛋白質圖譜，因此可以利用這些圖譜進行微生物的鑒定和分類。
樣品制備
1.純培養物的獲取：為了獲得準確的結果，首先需要從臨床樣本中分離出純培養物。這通常通過在選擇性培養基上單菌落分離來實現。
2.樣品處理：取少量純培養物，用于質譜分析。具體步驟包括：
-直接轉移法：將菌落直接轉移到質譜靶板上。
-提取法：對于一些難以直接分析的菌種，可以先進行蛋白質提取。例如，革蘭氏陰性菌可以用乙醇-甲酸進行簡單提取。
3.基質添加：在樣品上加入基質（如α-氰基-4-羥基肉桂酸），基質在激光照射下幫助樣品分子解吸和電離。
質譜分析
1.儀器校準：使用已知標準品對微生物鑒定質譜儀進行校準，以確保測量的準確性。
2.數據采集：將準備好的樣品靶板放入質譜儀，設定適當的激光強度和其他參數，進行數據采集。
3.數據處理：生成的原始數據通常是一個復雜的譜圖。通過專門的軟件將這些譜圖轉換為可識別的蛋白質圖譜。
數據分析與解釋
1.數據庫匹配：利用數據庫中的參考譜圖對樣品的質譜圖進行匹配。當前市面上有許多商業化的微生物質譜數據庫，如MALDIBiotyper和VITEKMS。
2.判定標準：匹配結果根據相似度得分進行判斷。通常，得分越高，匹配越準確。各公司提供的質譜數據庫都有自己的得分閾值，超過該閾值即可認為鑒定結果可靠。
3.結果驗證：對于罕見或鑒定結果不明確的菌種，可以通過16SrRNA基因測序等方法進一步驗證。
注意事項與常見問題
1.樣品純度：混合菌樣品可能導致質譜圖復雜化，影響鑒定準確性。因此，確保樣品純度至關重要。
2.儀器維護：定期校準和維護儀器，以保證其穩定性和準確性。
3.數據庫更新：持續更新質譜數據庫，以包含新的微生物譜圖，提高鑒定的覆蓋廣度和準確度。
